做WB时,buffer加多了怎么办
在进行Western Blot(WB)实验中,如果不小心向缓冲液中加入了过多的Buffer,可能影响蛋白的转移、结合或者信号的检测。解决这个问题的方法取决于具体情况和实验的阶段:
1. 样品制备阶段
如果是在样品制备阶段加入过多的Buffer,比如裂解缓冲液:
稀释:可以通过添加更多的样品来稀释过量的Buffer,前提是这样做不会导致蛋白浓度过低,影响后续检测。
浓缩:使用蛋白浓缩装置如离心浓缩器,移除多余的Buffer,重新调整至所需浓度。
2. 转移缓冲液阶段
如果是在准备转移缓冲液时添加过多的Buffer:
重新配制:最直接的方法是重新计算并配制新的转移缓冲液,确保正确的浓度和pH值。
调整:如果过量不多,可以尝试通过添加其他组分(如水或缺失的其他成分)调整浓度,达到理想的缓冲液比例。
3. 封闭/洗涤缓冲液阶段
简单调整:这种情况下通常问题不大,可以通过添加额外的水或其他成分来稀释至适当浓度。确保最终的溶液成分与原始要求一致。
4. 抗体稀释
重新稀释:根据需求重新计算并稀释抗体到正确的浓度。使用新的稀释液以确保抗体的活性和结合特性不受影响。
对于所有情况,重要的是确保在处理过程中密切监测所使用化学物质的量和浓度,以及维持实验条件的严格控制。如果加入过多的Buffer对实验结果产生了不可逆的影响,可能需要重新开始实验。在实验过程中应严格遵循标准操作程序,尽量避免此类错误的发生。
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