LC-MS定量原理是什么?
LC-MS(液相色谱-质谱联用)是一种将液相色谱(LC)与质谱(MS)结合的分析技术。LC-MS定量的原理包括液相色谱对样品进行分离,质谱对分离后的组分进行检测和定量。以下是LC-MS定量原理的主要步骤:
1、液相色谱分离:
在LC-MS系统中,首先利用液相色谱对样品中的组分进行分离。液相色谱通过不同的固定相和移动相以及梯度洗脱程序来实现组分的分离。分离的效果取决于色谱柱、流动相、洗脱条件等因素。
2、电喷雾电离:
经过液相色谱分离后,样品溶液被输送到质谱仪的电离源。在生物分析中,最常用的电离方式是电喷雾电离(ESI)。电喷雾电离将样品溶液转化为带电的气溶胶,然后将气溶胶中的样品分子或离子引入质谱仪。
3、质谱检测:
进入质谱仪后,样品离子经过质量分析器(例如四级杆、飞行时间、轨道阱等),按照质荷比(m/z)进行分离。质谱检测器检测到的离子信号强度与样品浓度成正比。通过测量目标离子的信号强度,可以实现对样品中的组分进行定量分析。
4、定量策略:
C-MS定量通常采用外标法、内标法或多点校正法。在外标法中,通过测量已知浓度的标准品,并绘制标准曲线,然后根据待测样品的信号强度来计算浓度。内标法通过添加已知浓度的同位素标记内标物质,可以校正样品制备和分析过程中的误差,提高定量的准确性和精确性。多点校正法则通过在不同浓度水平下建立多点校正曲线,使得定量结果更为可靠。
总之,LC-MS定量原理包括液相色谱分离、电离、质谱检测以及定量策略。通过对目标组分的信号强度进行测量和计算,可以实现准确、精确的定量分析。
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