根据生长曲线来看初始浓度107~108CFU/ml,培养2小时左右,细菌的吸光度值还没发生什么变化,那怎么收集目的细菌量呀?
在细菌培养的滞后期(Lag phase),即培养初始的2小时左右,细菌细胞主要在适应环境,细胞数量和吸光度(OD值)变化不明显。这时尚未进入对数增长期(Log phase),如果要收集足够的细菌量可以采取以下策略:
一、提高初始接种量
1、增加菌液初始浓度:直接提高起始菌液的浓度,接种时使用高浓度菌悬液,减少滞后期的影响。
2、浓缩菌液:使用离心法(4000-6000 g, 10分钟)将细菌浓缩后重新悬浮于新鲜培养基中。
二、增加培养基体积
1、扩大培养体积,增加总细菌培养量。
2、如果初始浓度较低,可以通过大体积培养(例如,1 L或更大)来确保收集到足够的细菌。
三、调整培养条件
1、优化温度:使用适宜细菌生长的最佳温度(如37°C对于大肠杆菌)。
2、通气量:提高摇瓶或生物反应器的通气量,保证氧气供应充足。
3、营养优化:使用高营养浓度的培养基(如LB、TB培养基)。
四、直接离心法
1、批量离心收集:直接离心初始培养液(4000-6000 g, 10分钟),收集菌体沉淀。
2、重复离心:如果单次菌量不足,可以多次离心、合并菌体沉淀。
五、延长培养时间
1、如果允许,可以适当延长培养时间,等待细菌进入对数生长期,此时细菌生长迅速,容易收集到大量菌体。
2、观察OD₆₀₀值,一般OD₆₀₀达到0.5-1.0时细菌量较为理想。
六、使用高效生物反应器
如果条件允许,使用发酵罐或连续培养系统可以更精确地控制生长条件,快速获得大量菌体。
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