请问dss在ip中怎样运用？

在免疫共沉淀 (Immunoprecipitation, IP) 实验中，DSS (辛二酸二琥珀酰亚胺酯, Disuccinimidyl Suberate) 是一种交联剂 (Cross-linker)，常用于稳定蛋白质-蛋白质相互作用，提高IP实验的效率和特异性。以下是DSS在IP实验中的应用流程：

 

一、细胞/组织处理

1、将细胞培养至合适密度。

2、使用缓冲液洗涤细胞，除去培养基残留。

 

二、DSS交联

1、配置DSS溶液

（1）在DMSO中配制DSS母液（典型浓度：10 mM）。

（2）在使用前立即稀释到工作浓度（通常为0.5–2 mM）。

 

2、交联反应

（1）将DSS溶液加入到细胞悬液或组织裂解液中。

（2）在室温下孵育30分钟，轻柔摇晃以确保充分反应。

（3）停止反应：使用Tris缓冲液 (50 mM Tris, pH 7.5–8.0) 终止反应，孵育15分钟以清除多余的DSS。

 

三、细胞裂解

1、使用IP裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂）裂解细胞。

2、离心去除细胞碎片，收集上清液。

 

四、免疫共沉淀 (IP)

1、将特异性抗体加入到裂解液中，4°C孵育过夜。

2、加入蛋白A/G磁珠或琼脂糖珠，4°C孵育2–4小时。

3、洗涤磁珠，去除非特异性结合物。

 

五、洗脱与分析

1、加入SDS-PAGE加载缓冲液，加热变性，洗脱蛋白质复合体。

2、进行SDS-PAGE电泳，后续使用Western Blot (WB) 或质谱 (MS) 进行分析。

 

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