采了人的粪便后续要做小鼠粪菌移植,请问可以直接把采集管冻存到-80嘛?还是需要加甘油之类的东西冻存呢?
在进行小鼠粪菌移植(FMT, Fecal Microbiota Transplantation)实验时,粪便样本的冻存和处理对微生物群落的存活及后续移植效果至关重要。直接将采集管冻存到-80°C可能会导致肠道菌群细胞的活性和多样性下降,因此通常需要采取一定的保护措施来维持微生物的活性和完整性。粪便样本冻存的标准方法如下:
1、冷冻保护剂:为了保护粪便中的厌氧菌群和其他微生物,通常会加入冷冻保护剂,例如:
(1)甘油 (Glycerol):最终浓度通常为10%-20%。甘油可以有效防止冰晶形成,减少菌体细胞膜损伤。
(2)DMSO(二甲基亚砜):浓度为5%-10%,同样有保护效果,但对某些细菌有一定毒性,因此使用较少。
(3)牛血清白蛋白 (BSA, Bovine Serum Albumin):有时也会加入1%-5%的BSA以增加保护效果。
2、操作步骤
(1)将新鲜粪便样本在无氧环境下均匀混悬于冷冻保护液(如10%甘油)中。
(2)在无菌条件下分装到无菌冻存管中,通常每管200-500μL。
(3)快速冷冻到-80°C,并避免反复冻融。
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