请问交联结束后的样品要怎么处理再去跑WB呢？
在完成交联（crosslinking）后，如果你计划继续进行Western Blot (WB)实验，样品需要进行适当的处理以确保交联物质不会干扰后续的蛋白质分析步骤。以下是一般的处理步骤：
一、终止交联反应
交联反应通常是通过交联试剂（例如甲醛）与蛋白质间形成共价键来固定蛋白质的空间结构，交联反应必须被终止以防止交联剂对后续实验的干扰。
1、终止交联剂：最常见的方法是添加甘氨酸（通常为50 mM，pH 7.5）或氨水来终止交联反应。甘氨酸与交联剂（例如甲醛）反应形成非活性化合物，阻止交联继续进行。
2、孵育时间：甘氨酸处理后，常常让样品在室温下孵育约5-15分钟，确保反应充分终止。
二、裂解细胞/组织并提取蛋白质
交联后的样品通常需要进一步裂解以提取蛋白质，由于交联后蛋白质可能变得较为稳定且不易溶解，因此需要使用含有蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液。
1、裂解缓冲液的选择：可以使用含有NP-40（非离子型表面活性剂）或Triton X-100的裂解缓冲液，或者含有尿素和硫脲的缓冲液，帮助破坏细胞膜并解开交联的蛋白质。
2、细胞裂解：对样品进行超声处理、反复冻融或其他物理方式来促进细胞裂解。
三、去除交联物质
交联后的样品中可能含有交联剂残留物，这些物质如果没有去除可能会对Western Blot的结果造成干扰，因此去除交联剂是非常重要的。
1、透析/超滤：通过透析或使用超滤膜（例如10-30 kDa的分子量截断膜）去除交联剂和小分子杂质。
2、选择合适的缓冲液：使用适合Western Blot的PBS或Tris-HCl缓冲液来洗脱样品。
四、蛋白质浓度测定
完成裂解并去除交联物质后，测定蛋白质浓度以确保样品的质量，通常使用BCA法或Bradford法进行定量。
五、加样与上样
交联后的样品可以按常规方法进行处理，样品需要加样品缓冲液并且常常需要进行加热（95°C，5-10分钟）以帮助蛋白质完全变性。
1、如果交联后蛋白质的结构已经较为稳定，可能需要稍微延长加热时间以保证蛋白质完全解聚。
2、样品量：通常用含有SDS-PAGE样品缓冲液的处理好的蛋白质样品上样。
六、Western Blot实验
完成样品处理后，接下来即可按照常规步骤进行Western Blot分析，包括SDS-PAGE凝胶电泳、转膜、封闭、抗体孵育、洗涤和显影等步骤。
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