提取组织蛋白的时候为什么加入蛋白酶抑制剂防止蛋白变形，后面制样又要加入SDS分解蛋白?

在蛋白提取和样品制备过程中，加入蛋白酶抑制剂和后续加入SDS是为了实现不同的实验目标，这两个步骤的作用虽然看似矛盾，实际上各有明确的科学意义。

 

一、加入蛋白酶抑制剂的目的

在组织破碎和蛋白提取的过程中，细胞内的蛋白酶可能被激活，这些蛋白酶会开始降解细胞中的蛋白质，导致目标蛋白被破坏或降解。这会影响实验结果，特别是在进行蛋白定量、免疫印迹等下游分析时。因此，在蛋白提取过程中加入蛋白酶抑制剂是为了防止这些蛋白酶的活性，保护目标蛋白不被降解，确保提取到的蛋白质尽可能完整和原始。

 

二、加入SDS的目的

在后续样品制备中，加入SDS的目的是为了实现蛋白质的完全变性，尤其在SDS-PAGE中。具体作用包括：

1、破坏蛋白质的天然结构： SDS是一种强效去污剂，能够破坏蛋白质的二级、三级和四级结构，将蛋白质线性化。

2、赋予负电荷： SDS与蛋白质结合，使蛋白质按其大小而非电荷进行分离。

3、标准化电泳迁移率： 在线性化后，蛋白质迁移率主要取决于分子量，从而便于定量和分离。

 

总结来说，蛋白酶抑制剂主要用于防止提取过程中蛋白质被降解，而SDS则用于将蛋白质变性，以便进行下游的分析。

 

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