蛋白在酶切之前就分成了相隔很近的两条带,在酶切后两条带分别减少,过akta后还是会出现相隔很近的两条带是什么原因,怎么解决?

    蛋白在酶切之前就分成两条相隔很近的带,并且在酶切和经过AKTA纯化后仍然出现这种现象可能有几个原因:


    1.蛋白异构体:

    可能存在蛋白的不同异构体或者蛋白质的不同翻译后修饰形式,如磷酸化、糖基化等。


    2.蛋白部分降解:

    蛋白可能在提取或处理过程中发生了部分降解,导致出现大小略有差异的多个片段。


    3.酶切不完全:

    如果两条带在酶切后分别减少,可能是酶切不完全导致的。酶切不完全可能是由于酶的活性不足、反应时间不够或酶与蛋白的比例不当等原因造成的。


    4.聚合体形成:

    某些蛋白在特定条件下容易形成二聚体或多聚体,这可能导致在电泳中出现两条接近的条带。


    解决这一问题可以从以下结合方面入手:

    • 翻译后修饰的检测:进行特定的生化实验来检测蛋白的翻译后修饰情况,如使用特定的抗体。
    • 优化蛋白提取条件:确保使用蛋白酶抑制剂和适当的提取条件,以防止蛋白在提取过程中降解。
    • 优化酶切条件:调整酶的用量、反应时间和温度,以实现完全酶切。
    • 分析蛋白聚合状态:通过如凝胶过滤色谱等方法检测蛋白的聚合状态。
    • 降低样品浓度:过高的蛋白质浓度可能导致聚合体形成,适当降低样品浓度可能有助于解决这个问题。
    • 纯化条件的优化:在AKTA纯化过程中调整柱子的类型、洗脱剂的种类和浓度、流速等,以提高纯化效果。

    百泰派克生物科技--生物制品表征,多组学生物质谱检测优质服务商


    相关服务:

    Shotgun鸟枪法蛋白质鉴定

    肽质量指纹图谱分析服务

    膜蛋白鉴定服务

    分子量测定

    蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定服务

    Pull-down靶蛋白质谱鉴定

    多肽质谱鉴定

    定量蛋白组分析

提交需求
姓名 *
联系类型 *
联系方式 *
项目描述
咨询项目 *

 

How to order?


/assets/images/icon/icon-rc2.png

客服咨询

/assets/images/icon/icon-message.png

提交需求

https://file.biotech-pack.com/static/btpk/assets/images/icon/icon-wx-2.png

https://file.biotech-pack.com/pro//bt-btpk/20241231/config/1874015350579343360-WX-20241231.jpg

联系销售人员

/assets/images/icon/icon-tag-sale.png

促销活动

/assets/images/icon/icon-return.png