如何检测WB实验中的蛋白质表达?

如何检测Western Blot（WB）实验中的蛋白质表达:

 

一、样品准备:

 

1.从感兴趣的细胞或组织中提取蛋白质。

 

2.量化提取到的蛋白质并制备样品。

 

二、SDS-PAGE凝胶电泳:

 

1.选择合适的凝胶浓度并倒模。

 

2.加载等量的蛋白质样品并进行电泳。

 

三、膜转印:

 

1.选择合适的转印缓冲液和膜（通常为聚偏氟乙烯(PVDF)或硝酸纤维素）。

 

2.将凝胶上的蛋白质转印到膜上。

 

四、阻断和抗体孵育:

 

1.使用适当的阻断液（通常是5%非脱脂牛奶或BSA）阻断非特异性位点。

 

2.首先用特异性的一抗孵育，然后用与一抗免疫反应的二抗孵育。

 

五、信号检测:

 

1.根据所使用的二抗，选择相应的信号检测方法（例如化学发光或荧光）。

 

2.使用成像系统获取图像。

 

六、数据分析:

 

1.使用图像分析软件定量每个条带的信号强度。

 

2.进行统计分析以确定蛋白质表达的差异。

 

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