质谱分析蛋白翻译后修饰
质谱分析蛋白翻译后修饰可以分析修饰类型、修饰位点以及对翻译后修饰蛋白进行定量。百泰派克生物科技提供质谱分析蛋白质翻译后修饰的服务。
质谱分析蛋白翻译后修饰
相对于蛋白质印迹等技术,质谱技术能更有效的对蛋白质的翻译后修饰进行分析,且可以对常规的Western blot 翻译后修饰蛋白鉴定进行补充。质谱分析蛋白翻译后修饰一般使用自下而上的基于肽段的方法。但是自下而上的质谱方法无法保证可以完全识别目的蛋白的特定翻译后修饰,因为质谱是通过蛋白质序列内的多个肽段来鉴定的,这大大降低了翻译后修饰肽段被识别的机会。一种提高质谱仪检测到修饰肽段数量的策略是使用PTM亲和试剂进行肽段富集,而不是使用PTM亲和试剂进行蛋白富集,这将减少富集的未修饰肽段的数量。
质谱分析蛋白翻译后修饰原理
相较于没有发生翻译后修饰的蛋白,翻译后修饰蛋白会在特定肽段序列有分子量的增加。在蛋白翻译后修饰方式的质谱分析过程中,蛋白会首先被酶切成肽段,然后进入质谱进行分析;通过质谱分析,得到的是一系列肽段的相对分子质量信息。对于某一个特定的肽段而言,在没有发生任何翻译后修饰的情况下其序列信息和分子量是确定的,当它发生了某种翻译后修饰之后,例如磷酸化修饰,因为磷酸根的分子量也是确定的,所以在质谱检测过程中如果发现部分肽段的分子量刚好增加了一个磷酸根的分子量,则可以假设这个肽段发生了磷酸化修饰,再通过二级或多级质谱的谱图进行二次确认即可实现翻译后修饰类型鉴定及修饰位点分析等。
质谱分析蛋白翻译后修饰
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