请问非靶向代谢组测序最好是送混样还是单样啊？
靶向代谢组测序送样选择混样还是单样，主要取决于实验目的和样本特性。如果需要分析个体差异或进行统计学比较（例如疾病组vs对照组），建议送单样，因为混样会掩盖个体特异性，无法进行差异分析。如果是探索群体共性或降低检测成本（例如初步筛选某群体的代谢特征），混样可以均质化样本、减少批次效应，但会丢失个体数据。若样本量少或存在明显异质性（如不同生理状态），优先单样。预算充足时推荐单样，后续分析更灵活。
一、选择混样的适用场景及优缺点
1、适用场景
（1）探索群体共性特征：若目标是比较不同组间（如疾病组 vs 健康组）的**整体代谢差异**，且组内个体差异较小，混样可降低个体变异对结果的影响。
（2）预算有限：测序成本较高时，混合样本可减少测序样本量，降低成本。
（3）降低技术误差：同一批次检测混样可减少实验操作（如提取、上机）的批次效应。
2、优点
（1）成本低，节省测序资源和时间。
（2）减少技术重复带来的随机误差。
3、缺点
（1）掩盖个体差异：可能漏检个体特异性代谢物（如亚群体生物标志物）。
（2）稀释效应：低丰度代谢物在混合后可能被稀释至检测限以下。
（3）无法进行统计学差异分析：混合样本无法计算组内变异，导致统计效力下降。
4、建议
若必须混样，建议每组至少混合3份生物学重复（如各取等量混合），且需确保组内样本高度同质。
二、选择单样的适用场景及优缺点
1、适用场景
（1）发现个体差异：例如寻找疾病亚型标志物、研究代谢物个体间变异等。
（2）样本异质性高：如人群代谢组、环境暴露差异大的样本。
（3）需统计学验证：需通过组间比较（如t检验、方差分析）筛选差异代谢物。
2、优点
（1）保留完整的生物学变异信息，适合差异分析和生物标志物挖掘。
（2）避免稀释效应，提高低丰度代谢物检出率。
（3）支持更复杂的统计学模型（如PCA、PLS-DA等）。
3、缺点
（1）成本高，需更多测序样本量（每组建议≥6个生物学重复）。
（2）技术重复可能引入操作误差。
4、建议
（1）若预算允许，优先选择单样设计以获取更可靠的结论。
（2）需严格设置生物学重复（每组6-10个样本）以提高统计效力。
三、折中方案：分组混合（Group Pooling）
1、若样本量极大（如临床队列研究），可每组内混合少量样本（例如每组3个混合样本，每组重复3次），平衡成本和数据质量。
2、操作示例：将每组30个样本随机分为10个亚组，每个亚组3样本混合，最终产生10个混合样本用于测序。
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