请问高效液相仪器如何操作？怎么做高效液相测定含量，怎么计算药物装载率？
一、操作高效液相色谱仪（HPLC）的步骤如下
1、开机与准备
（1）电源启动：打开HPLC系统的电源，包括泵、检测器、自动进样器（如有）和电脑软件。
（2）流动相准备：配制所需的流动相，并进行脱气处理（使用超声波仪或通过系统自带的在线脱气装置），确保流动相干净无气泡。
（3）色谱柱安装：选择适合的色谱柱（如C18反相色谱柱）并安装在色谱系统中，确保连接稳固无气泡。
（4）冲洗管路：打开泵，以低流速（如0.1 mL/min）让流动相流过系统，冲洗管路和色谱柱，排除空气。
2、系统参数设置
（1）流速设置：根据实验要求设置流动相的流速，通常为0.5-1 mL/min。
（2）柱温设定：如需恒温控制，设定柱温（一般为25-40°C），根据实验需求调整。
（3）检测器设置：选择检测器（如UV-Vis）并设置适合目标化合物的波长（如254 nm、280 nm等），对于质谱检测器（MS），设置离子源参数等。
3、系统平衡
（1）系统预冲：在正式进样前，使用流动相冲洗系统和色谱柱，通常需要平衡20-30分钟，直到基线稳定。
（2）检查基线：通过软件监测检测器的基线稳定性，确保无噪音和波动过大。
4、样品进样
（1）样品制备：将样品溶解于流动相兼容的溶剂中，并使用滤膜（0.22 μm或0.45 μm）过滤样品，避免颗粒堵塞色谱柱。
（2）进样：手动进样或使用自动进样器进行样品注射，设定进样体积（通常为10-20 μL）。
（3）样品分析：启动样品分析，HPLC系统根据预设程序分离样品中的组分。
5、数据采集
（1）监控色谱图：通过软件实时观察色谱图，记录目标化合物的保留时间、峰面积等数据。
（2）数据保存：完成分析后，保存色谱数据，供后续定量或定性分析使用。
6、实验结束与清洗
（1）系统清洗：分析完成后，用高比例有机溶剂（如乙腈或甲醇）冲洗系统和色谱柱，以防流动相残留导致柱子堵塞或性能下降。
（2）色谱柱保存：如果长时间不使用，按照说明将色谱柱用合适的保存液（通常是甲醇）冲洗保存。
7、关机
（1）停止泵运行：关闭泵，停止流动相的输送。
（2）关闭系统：关闭HPLC仪器和检测器，最后关闭软件和电脑。
二、高效液相测定含量的过程一般如下
1、根据已知浓度的标准品制作出不同浓度的溶液，然后进行高效液相色谱分析，得到各浓度下的峰面积，并绘制标准曲线。
2、用同样的方法测定样品的峰面积，然后根据标准曲线，确定样品中待测物质的浓度。
三、药物装载率的计算
1、药物装载率定义：药物装载率是指载体（如纳米颗粒、脂质体）中药物的质量占药物-载体复合物总质量的百分比。
2、测定药物质量：使用HPLC测定复合物中的药物浓度。
3、载体和药物总质量：通常是复合物制备时已知的载体质量和药物的总质量。
4、药物装载率的计算公式：药物装载率(%) = (实际装载药物质量 / 载药体质量)×100%
例如，如果载药体质量为100mg，实际装载药物质量为10mg，那么药物装载率为10%。
百泰派克生物科技--生物制品表征，多组学生物质谱检测优质服务商
相关服务：
How to order?
