HPLC的分离原理是基于样品分子在固定相和流动相之间的不同分配系数。固定相通常为填充在色谱柱中的固体颗粒,而流动相是以高压推动的液体。在HPLC过程中,样品分子会根据其与固定相和流动相之间的相互作用(如极性、疏水性、电荷等)不同而表现出不同的保留时间。当样品随流动相通过色谱柱时,不同组分会以不同的速度被洗脱出来,从而实现分离。检测器随后分析洗脱出的各组分,生成色谱图用于定性和定量分析。
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