蛋白分析FAQ汇总

• • 请问DSP或者DSS这种交联剂可以先放在37°C吗？

  通常不建议将这些交联剂长时间放置在37°C下，因为它们的化学稳定性在较高温度下会受到影响，从而导致降解或者失效。

• • 蛋白质二级结构代表什么?

  蛋白质的二级结构是指蛋白质主链（由氨基酸组成的肽链）通过氢键和其他非共价相互作用形成的局部空间结构。二级结构代表了蛋白质在空间中的折叠方式，是蛋白质整体三维结构形成的基础之一。蛋白质的二级结构包括两种主要类型：α-螺旋（Alpha helix）和β-折叠（Beta sheet），此外，还可能

• • 请问发酵过程有去除o-糖基化杂质的方法吗?

  在发酵过程中，去除O-糖基化杂质是一个复杂但重要的步骤，特别是在生产生物制药产品时。以下是一些可能的方法和策略，可以帮助去除或减少 O-糖基化杂质：

• • 我想做蛋白质质谱分析，请问有没有切胶的方法？

  在蛋白质质谱分析中，切胶是样品制备的重要步骤之一。通过切胶，我们可以从聚丙烯酰胺凝胶中提取出目的蛋白进行后续的质谱分析。以下是进行切胶的方法步骤及注意事项：

• • 为什么蛋白质要交联？

  蛋白质交联（Protein Crosslinking）是一种重要的生物化学技术，它通过化学方法将两个或多个蛋白质分子连接在一起，通常是通过形成共价键。这种技术在蛋白质研究中有广泛应用，特别是在研究蛋白质相互作用、蛋白质结构与功能以及蛋白质复合物时。以下是蛋白质交联的几个关键原因和应用：

• • 怎么解决蛋白质包涵体情况?

  蛋白质在表达过程中形成包涵体是常见的现象，尤其是在原核表达系统（如大肠杆菌）中。包涵体是一种不溶性的蛋白质聚集体，通常由错误折叠的蛋白质链组成。解决蛋白质包涵体问题的策略主要包括优化表达条件、改进蛋白质折叠和使用复性技术等。

• • 如果一个蛋白既有内质网中滞留信号又有进入线粒体信号序列，那么它最终会定位何处?

  当一个蛋白质同时具有内质网（ER）滞留信号和线粒体导向信号时，它的最终定位将取决于这些信号序列的相对强度和定位过程中的竞争机制。通常，以下因素会影响它的最终定位：

• • 目前研究蛋白质空间结构最主要的方法是什么？

  目前研究蛋白质空间结构的主要方法有X射线晶体学（X-ray Crystallography）、核磁共振（NMR）光谱学、冷冻电镜（Cryo-EM）、计算模拟与同源建模（Computational Modeling and Homology Modeling）和小角X射线散射（SAXS）。

• • 甲醛固定交联后测蛋白浓度，基本测不出来，是不是这一步需要去交联后才能测浓度？

  是的，甲醛固定交联后，蛋白质的结构和溶解性会发生改变，可能会影响蛋白浓度的测定。甲醛会在蛋白质分子之间形成共价交联键，使蛋白质形成不可溶的网状结构，这样的交联蛋白质很难被传统的蛋白质浓度测定方法（如BCA、Bradford等）检测到。因此，在甲醛交联后，如果要准确测定蛋白浓度，通常需要先进行

• • 在蛋白交联后,用碧云天试剂盒里的裂解液进行细胞裂解,但BCA法测定浓度很低,请问是什么原因呢？

  在蛋白交联后使用BCA法测定蛋白浓度时，如果得到的浓度很低，可能有几个原因：交联效果、试剂反应条件、裂解液的影响、样品稀释度、试剂盒的过期或保存不当。