多肽测序
已经被鉴定识别的天然肽多达数千种，它们在人类的生理过程中扮演着重要的角色，包括作为激素、神经递质、生长因子、离子通道配体或抗感染等等。多肽类药物被认为具有高选择性和有效性，同时，具有相对安全和良好的耐受性。因此，人们对多肽类药物在药物研究和开发(R&D)方面的兴趣越来越大，数百种多肽类药物正在进行临床试验评估。
肽和蛋白质都是由人体的基本组成部分-氨基酸组成，并通过肽键结合在一起。他们的区别在于肽是由比蛋白质小的氨基酸链组成的。肽包含两个或多个氨基酸，可细分为低聚肽和多肽，低聚肽含有少量的氨基酸(约2-20个氨基酸)，多肽则含有更多氨基酸。但是这个定义以及科学家使用每个术语的方式有时候并没有那么严谨。蛋白质是由一个或多个肽连接在一起而形成的。因此，蛋白质本质上是非常大的肽。一般情况下，我们按照氨基酸的数量对多肽和蛋白质进行区分，多肽由2到50个氨基酸组成，而蛋白质则由50个或更多的氨基酸组成。多肽类药物研究具有巨大的潜力，如新肽的发现，更有针对性的肽库和序列优化设计，新配方的研发，多功能肽及复合物的研发等等。而要实现这些，对多肽进行鉴定，对多肽序列进行分析，是推动研究的第一步。
多肽测序示意图
基于质谱的多肽序列分析
多肽的序列测定常见的有两种方法：数据库搜索和de novo从头测序法。比较短的肽段，比如小于30个氨基酸时，百泰派克生物科技采取直接进行二级碎裂的方式得到质谱原始数据进行肽段序列的推导，通过数据库搜库或者从头测序的方式，即可获得其理论序列。而对于长度比较长的肽段（>30个氨基酸），百泰派克生物科技会使用3种蛋白酶分别对靶肽段进行酶切和鉴定，在得到碎裂肽段片段的同时，经过肽段之间的拼接完成肽段序列100%的测定，即通过从头测序的方法进行测定。对于部分肽段混合物也可以基于上述方法进行序列分析。
百泰派克生物科技使用Thermo公司最新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪结合Nano-LC纳升色谱技术，提供基于质谱的多肽序列分析服务以及多肽de novo从头测序服务，对多肽序列进行分析。百泰派克使用Thermo公司最新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪实现对肽段样品的序列分析，Obitrap Fusion Lumos质谱仪是现在分辨率和灵敏度最高的质谱仪，保证了低丰度肽段碎裂片段鉴定的灵敏度；同时在肽段碎裂过程中采取HCD与ETD结合的模式，保证肽段碎裂片段的完整性。得到质谱原始数据之后，对于小于30个氨基酸的肽段我们使用数据库或de novo从头测序的方式对原始数据进行解析。>30个氨基酸的肽段一般采用从头测序的方式对多肽序列进行推导。
样品制备的建议：
• 尽可能准备100 ug的样品：<30 aa的样品至少准备10-25 ug的样品，>30 aa的样品尽量准备至少>50 ug且纯化的样品；
• 尽量使用最纯的试剂，而不是分子生物学级别的试剂；
• 尽量使用最小的离心管；
• 尽量避免污染物，或在溶液中对蛋白质进行浓缩。
**可咨询百泰派克生物科技的技术人员，有针对性的进行样品制备。
百泰派克生物科技可对来自液体及固体状态下的样品进行多肽序列分析。固体样品，使用冰袋运输即可；溶液样品，可进行真空抽干或冷冻抽干后，使用冰袋运输，也可通过干冰对样品进行运输。欢迎来电咨询。
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