二硫键含量的测定

二硫键（disulfide bond）是由两个半胱氨酸残基之间的硫原子形成的共价键。在许多蛋白质中，这种共价键有助于稳定蛋白质的三维结构。二硫键的测定是一项重要的生物化学研究内容，一些常用的二硫键含量测定方法：

1.Ellman's试剂法 (DTNB法):

Ellman's试剂，即5,5'-dithiobis-(2-nitrobenzoic acid) (DTNB)，与还原的硫醇反应生成一个黄色的产物，其吸光度可以在412nm处测定。

通常使用还原剂如dithiothreitol (DTT) 或 2-mercaptoethanol来还原二硫键，产生硫醇。

通过测定DTNB与硫醇反应前后的吸光度变化，可以估算样品中的二硫键含量。

 

2.质谱分析:

使用质谱技术可以鉴定蛋白质中的二硫键连接的两个半胱氨酸的确切位置。

样品通常需要先用特定的还原剂处理，然后用轻微碱性的反应条件来碱化二硫键。

 

3.荧光标记:

某些荧光试剂，如monobromobimane，可以与硫醇发生反应，但不与二硫键发生反应。

通过将蛋白质先与荧光试剂反应，然后再使用还原剂处理并再次与荧光试剂反应，可以测定二硫键的含量。

 

4.电泳分析:

不含还原剂的SDS-PAGE可以用来分析蛋白质中的二硫键。

存在二硫键的蛋白质在没有还原剂的情况下会呈现出不同的电泳迁移模式。

 

5.分子建模与结构预测:

对已知结构的蛋白质，可以通过X射线晶体学或核磁共振 (NMR) 结构数据来直接观察二硫键。

对于没有已知结构的蛋白质，可以使用生物信息学工具预测其二硫键。

 

百泰派克生物科技--生物制品表征，多组学生物质谱检测优质服务商

 

相关服务： 

蛋白二硫键鉴定和定量分析

生物药二硫键/游离半胱氨酸检测

蛋白质结构鉴定

蛋白质一级结构的测定

蛋白质质谱鉴定

翻译后修饰蛋白组分析