泛素化怎么检测

泛素化的检测可用于识别特定氨基酸残基的泛素化或确认特异的泛素连接酶/结合酶的作用。泛素化检测策略：先经过泛素化富集策略对样本中的泛素化总蛋白进行富集纯化，得到的泛素化蛋白使用去泛素化酶进行去泛素化处理，之后用靶蛋白的特异性抗体进行SDS-PAGE/免疫印迹检测，最后通过条带比对分析实现对泛素化蛋白的定性及半定量分析。

检测蛋白泛素化主要分为体内检测和体外检测，体内泛素化检测方法是采用体内免疫共沉淀法（CO-IP），然后进行SDS-PAGE/免疫印迹检测后观察泛素化蛋白典型的梯状特征。体外泛素化检测需要提供靶蛋白、泛素及其相关连接酶和结合酶，之后结合SDS-PAGE检测后通过蛋白免疫印迹实验来直接检测目标蛋白的泛素化修饰。

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