CUT&Tag分析服务
- 背景噪声更低：无需化学交联，减少非特异性结合。
- 分辨率更高：可清晰定位到转录因子和组蛋白修饰的结合区域。
- 加速实验周期：整合片段化与文库构建流程，大幅缩短实验周期
- 使用10% DMSO+90%胎牛血清的冻存液，保持4℃运输。
- 液氮速冻储存，建议温度保持在-80℃以下，用干冰运输。
CUT&Tag（Cleavage Under Targets and Tagmentation）是一种专注于DNA-蛋白互作研究的革新性工具，主要用于识别转录因子或组蛋白修饰在全基因组范围内的结合位点。CUT&Tag分析服务利用酶切与转座酶标记技术，精准定位转录因子或组蛋白修饰在基因组中的结合位点，助力研究DNA-蛋白互作机制，为基因组和表观遗传学研究提供精准解决方案。其高灵敏度、低背景噪声和对微量样本的优越适应性，使其在表观遗传学研究领域独树一帜。
Kaya-Okur, H. S. et al. Nat Commun. 2019.
CUT&Tag实验原理
在基因组和表观遗传学研究中，探索DNA-蛋白互作机制是理解基因调控的关键。转录因子通过结合启动子或增强子区域的特定DNA序列，调控RNA聚合酶的招募及基因转录启动，其结合效率决定基因表达的时空模式。组蛋白作为染色质的核心组成，通过翻译后修饰（如乙酰化、甲基化等）调控染色质开放程度和DNA可及性，从而影响转录因子与DNA的结合。这种结合既可能激活基因表达，也可能引发沉默效应。蛋白质-DNA互作分析可解析转录因子与组蛋白修饰在基因调控中的协同作用，为揭示表观遗传机制和疾病发生提供重要线索。
Itou, H. et al. J Biol Chem. 2015.
晶体结构中观察到的蛋白质-DNA 相互作用
CUT&Tag使用ProteinA/G-Tn5融合蛋白直接结合目标蛋白，免除了传统方法的交联步骤，大幅降低背景噪声，并实现高分辨率的结合位点检测。相比传统ChIP-seq技术，CUT&Tag更适用于微量样本，特别是在组蛋白修饰和转录因子结合位点研究中展现卓越性能，是揭示基因调控机制的强大工具，为疾病研究和药物开发提供了高效解决方案。
百泰派克生物科技提供的CUT&Tag分析服务依托先进的Protein A/G-Tn5融合蛋白体系和高通量测序平台，专注于解析蛋白质-DNA互作，特别是转录因子结合位点和组蛋白修饰的全基因组分布。我们的服务涵盖从样本制备、测序到数据分析的全流程支持，提供全面的基因组注释、功能分析和信号通路解析，帮助客户精准揭示基因调控网络，为表观遗传学、疾病研究和新药开发提供高效解决方案：
1. 样本处理与磁珠结合
使用ConA磁珠与细胞膜上的糖蛋白结合，提取细胞核或直接利用细胞核样本。同时，通过洋地黄皂苷（digitonin）透化细胞膜以增强核膜通透性，为后续抗体结合创造条件。
2.一抗与二抗结合
加入针对靶标蛋白的特异性抗体（一抗）并进行孵育（如α-H3K27me3作为阳性对照，同型对照IgG作为阴性对照），随后洗涤去除非特异性结合。再加入二抗，确保抗体复合物成功结合靶标区域。
3. Protein A/G-Tn5转座体结合
采用Protein A/G-Tn5融合蛋白与抗体复合物结合，将Tn5转座酶精准定位到靶标蛋白结合的DNA区域，形成高效转座复合体，为后续片段化和接头连接奠定基础。
4. Tn5转座酶激活与DNA片段化
加入含Mg²⁺的反应液激活Tn5转座酶，在靶标DNA结合位点进行精准片段化，同时将测序接头直接插入DNA片段，完成文库前期构建。
5. 测序与生物信息分析
利用Illumina测序平台对文库进行高通量测序，获得高分辨率数据。结合专业的数据分析平台，完成质控、基因组比对、富集峰注释、Motif识别、GO功能分析和KEGG通路分析，为研究转录因子及组蛋白修饰的功能作用提供全面解析。
Galli, S. et al. RSC Chem Biol. 2024.
CUT&Tag技术流程
技术优势
与传统的ChIP-seq技术相比，CUT&Tag在多个维度上表现优异：
送样建议
百泰派克生物科技的CUT&Tag分析服务通过高效的转座酶标记与酶切技术，为基因组和表观遗传学研究提供精准的蛋白-DNA互作分析。准确的样本制备和储存是实现高质量分析的关键，因此建议按照以下方法处理您的样本：
细胞样本
1. 清洗与消化：移除旧培养液后，用PBS清洗一次。加入适量胰蛋白酶（覆盖细胞层表面）轻轻消化。
2. 离心与洗涤：以1000rpm离心5分钟，去除上清后再用PBS清洗一次。
3. 保存准备：加入适量配制好的冻存培养液，轻轻吹匀细胞并进行计数。建议每管细胞数量≥50万个。
4. 分装与冷冻：将细胞分装到冻存管中，每管加入150μl冻存液，确保每个样本平行2-3管。样本应在-80℃冰箱中预冷后储存，并采用干冰运输。
组织样本
1. 取样与清洗：从活体获取的新鲜组织应使用PBS清洗表面污物。样本可在4℃的1640或DMEM培养基中临时存放，但需在3小时内完成后续处理。
2. 切割与处理：将组织切割成细小碎片或肉糜状，分装到多个冻存管中，建议每个样本分装2-3个管。
3. 冻存液准备：可选择以下两种方式：
若有其他特殊样品，请随时与我们联系。
结果展示
案例分析
CUT&Tag 揭示组蛋白乳酸化修饰在胰腺导管腺癌（PDAC）中的基因组分布及其对基因表达的影响
研究利用CUT&Tag技术分析了乳酸化修饰在PDAC中的基因组分布及其对基因表达的影响。通过CUT&Tag绘制了组蛋白乳酸化（H3K18la）在胰腺癌细胞基因组中的结合图谱，研究发现H3K18la主要富集于肿瘤相关基因的启动子和增强子区域，结合RNA-seq数据表明，这些区域的乳酸化水平与糖酵解及肿瘤相关基因的高表达密切相关。研究进一步揭示了糖酵解代谢产生的乳酸可驱动组蛋白乳酸化，而乳酸化修饰又通过促进糖酵解关键基因的表达形成正反馈回路，从而加速肿瘤进展。通过这一机制，研究强调了乳酸化修饰在PDAC中的关键作用，并为肿瘤治疗提供了潜在的靶点。CUT&Tag技术灵敏高效地揭示了H3K18la的染色质结合特性，展现出其在解析组蛋白翻译后修饰机制中的重要优势。
Li, F. et al. Mol Cancer. 2024.
CUT&Tag分析以筛选H3K18la的结合位点
百泰派克生物科技的CUT&Tag分析服务能够高效挖掘基因调控的核心机制。我们的专业团队和先进平台为每一位客户提供高质量、可重复的研究数据，助力生命科学领域的重大突破。欢迎联系我们，了解更多关于CUT&Tag分析服务的详细信息。
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